Werkwijze

Voordat je de lichtgevende bacteriën kunt klaarmaken,
neem je 12mL fresh-medium die je pipetteert in een buis.
Fresh-medium is kunstmatig zeewater met glucose.
De buis met het fresh-medium plaats je in de incubator.
Dit is een apparaat dat de buis op een bepaalde temperatuur houdt,
in dit geval is dat 15graden Celsius.

    1) Bacteriën klaarmaken
    - 1 ml bacteriën uit de kweek nemen
    - 18 seconden centrifugeren, waarvan 5 seconden op 13000 rpm
    - De bacteriën zijn gesedimenteerd op de bodem van het cuvet,
      erboven is een heldere supernatant (vloeistof),
      deze moet je eruit pipetteren.
    - Vervolgens voeg je 1 mL fresh-medium toe aan de overgebleven bacteriën
    - Vervolgens centrifugeer je weer 18 seconden,
      waarvan 5 seconden op 13000 rpm
    - Je hebt weer een helder supernatant gekregen,
      deze moet je eruit pipetteren
    - Aan de overgebleven bacteriën voeg je 1 mL fresh-medium toe
    - Vervolgens pipetteer je 50 microliter bacteriën oplossing in
      de 12 mL fresh-medium die in de incubator staat
Om te kijken of de lichtgevende bacteriën licht geven,
neem je 0,5 mL van het net gemaakte fresh-medium oplossing met bacteriën.
Deze 0,5 mL pipetteer je in een cuvet. Dit cuvet plaats je vervolgens
in de lichtmeter. Bij ons gaf de lichtmeter 3191 relatieve lichteenheden aan,
dus we hadden onze lichtgevende bacteriën goed klaargemaakt.

    2) Monster voorbereiding
    - Je neemt een cuvet en je pipetteert hierin 1 mL van het monster
    - Je voegt hieraan 100 microliter 22% NaCl oplossing toe
    - Vervolgens maak je een 1:1 verdunning
      Je neemt dan nog 4 extra cuvetten.
      In de eerste cuvet doe je alleen 0,5 mL Diluent, dit is kunstmatig zeewater.
      Van de cuvet die je al hebt pipetteer je 0,5 mL uit, dit doe je in cuvet 4,
      vervolgens pipetteer je weer 0,5 mL uit cuvet 4 en dit doe je in cuvet 3.
      Uit cuvet 3 pipetter je ook 0,5 mL en dit doe je in cuvet 2. als laatste
      pipetteer je nog 0,5 ml uit cuvet 2, zodat in iedere cuvet 0,5 mL zit.
    Het ziet er dan schematisch zo uit:
 1.  0,5mL Diluent
 2.  0,5 mL Diluent      <-- 0,5mL van 3
 3.  0,5 mL Diluent             <-- 0,5mL van 4
 4.  0,5 mL Diluent                   <-- 0,5mL van 5
 5.  1,0 mL monster + 100 microliter 22% NaCl
      Diluent is kunstmatig zeewater, hierin is 2% NaCl opgelost.
    - Dit laat je 5 min bij 15 graden Celsius(incubator) staan.
    - Vervolgens voeg aan elke cuvet 0,5 ml bacteriesuspensie toe.
    - Je Incubeert nogmaals 5 min bij 15 graden Celsius.
    - Vervolgens plaats je de cuvetten op volgorde in de lichtmeter,
      vanaf cuvet 2 lees je de remming af.
    - Als je het aantal relatieve lichteenheden hebt afgelezen
      plaats je de cuvet terug in de incubator en
      incubeer je totdat ze er totaal 30 minuten bij
      15 graden Celsius in de incubator hebben gezeten.
    - Na 30 minuten plaats je nogmaals de cuvetten op volgorde
      in de lichtmeter. Vanaf cuvet 2 lees je de remming af.
      Dit doe je omdat sommige stoffen langer in contact
      moeten staan met de lichtgevende bacteriën.