Voedingsbodem voor de lichtgevende bacteriën
Vloeibaar medium
Benodigde stoffen en hoeveelheden voor de erlenmeyer van 0.5L:
NaCl 10 g
K2HPO4 1,95 g
KH2PO4 1,05 g
NH4Cl 2,5 g
MgSO4·7H2O 0,5 g
KCl 0,37 g
Gistextract 2,5 g
Tryptone 2,5 g
Tris-HCl, 1M, pH 7,5 25 mL
Glycerol 1,5 mL
Demi water aanvullen tot 0,5L
Vervolgens breng je de pH van het medium tot 7,3 met behulp
van 1M NaOH en een pH-meter.Verdeel het medium in 50 mL
hoeveelheden over vier 250 ml erlenmeyerkolven. Sluit de hals af
met een wattenprop en breng een aluminiumkapje aan. Dit doen we
om waterverlies tegen te gaan. Autoclaveer het medium door
15 minuten bij 121 C in de snelkookpan te verhitten.
Vaste voedingsbodem (agarplaat)
Voor een vaste voedingsbodem voeg je 4,5 gr bactoagar toe aan 300mL
vloeibaar medium. Laat het medium na het autoclaveren afkoelen
tot circa 45 graden Celsius. Voordat je platen kunt gieten moet je
je labtafel met 70% ethanol ontsmetten. Het beste is dan om zo
dicht mogelijk bij de bunsenbrander te werken. Je verhit ongeveer
2 seconden de hals van de erlenmeyer in de vlam. Je licht vervolgens
het deksel van de petrischaal op en daar gaat giet je dan 10 tot 12 ml
medium in. Houdt het deksel daarbij vast en sluit na het gieten
onmiddellijk de petrischaal. Je laat dan de voedingsbodem stollen en
je bewaart de platen op zijn kop. Je werkt dicht bij de vlam,
omdat daar de lucht door de warmte opstijgt zodat er geen bacteriën
op je agarplaat kunnen vallen.Daarna neem je een voedingsbodem met
losse kolonies Vibrio fischeri. Je verhit het oog van de entnaald
tot dat hij roodgloeiend is. Na het afkoelen pak je met de entnaald
enkele losse kolonies en deze strijk je vervolgens uit over
de nieuwe voedingsbodem. Vervolgens wacht je 48 uur,
want daarna is het resultaat pas zichtbaar.